Polimerazės grandininė reakcija, sutrumpintai kaipPGRanglų kalba – tai molekulinės biologijos metodas, naudojamas specifiniams DNR fragmentams amplifikuoti.Tai gali būti vertinama kaip ypatinga DNR replikacija už kūno ribų, kuri gali labai padidinti labai nedidelį DNR kiekį.Per visąPGRreakcijos procese gyvybiškai svarbų vaidmenį atlieka viena medžiagų klasė – fermentai.
1. Taq DNR
Eksperimentuose pirmosiomis dienomisPGR, mokslininkai naudojo Escherichia coli DNR polimerazę I, Tačiau su šiuo fermentu yra problema: kiekvieną kartą, kai atliekamas ciklas, jį reikia papildyti nauju fermentu, todėl operacijos žingsniai šiek tiek apsunkinami ir sunku visiškai automatiškai amplifikuoti.Ši problema buvo išspręsta po to, kai 1988 m. mokslininkai atsitiktinai išskyrė Taq DNR polimerazę iš Thermus aquaticus. Nuo tada automatinis DNR amplifikavimas tapo realybe.Šio fermento atradimas taip pat leidžiaPGRtechnologija yra patogi, praktiška ir universali technologija.Šiuo metu Taq DNR polimerazė yra labiausiai paplitusi polimerazė DNR rinkiniuose.
2. PfuDNA
Kaip minėta aukščiau, Taq DNase turi didelę klaidą, todėl mokslininkai tam tikru mastu modifikavo Taq DNR polimerazę, kad išvengtų nespecifinio amplifikacijos dėl neatitikimo, dėl ko gaunami netikslūs tyrimo rezultatai.Tačiau Taq DNR polimerazės modifikacija gali slopinti DNR polimerazės aktyvumą kambario temperatūroje.PfuDNA polimerazė gali gerai kompensuoti minėtus Taq DNR polimerazės trūkumus, todėl PGR reakcija gali būti atliekama įprastai ir gali būti veiksmingai pagerintas tikslinio geno amplifikacijos sėkmės rodiklis.
3. Atvirkštinė transkriptazė
Atvirkštinė transkriptazė buvo atrasta 1970 m. Šis fermentas naudoja RNR kaip šabloną, dNTP – kaip substratą, vadovaujasi bazių poravimo principu ir sintezuoja DNR vieną grandinę, papildančią RNR šabloną 5′-3′ kryptimi.Atvirkštinė transkriptazė pirmiausia priklauso nuo DNR polimerazės aktyvumo iš DNR arba RNR šablonų, todėl neturi 3′-5′ egzonukleazės aktyvumo.Tačiau jis turi RNazės H aktyvumą, kuris tam tikru mastu riboja atvirkštinės transkriptazės sintezės trukmę.Dėl mažo laukinės atvirkštinės transkriptazės tikslumo ir termostabilumo mokslininkai ją taip pat modifikavo.
DėlPGREksperimentų metu pagrindinės eksploatacinės medžiagos yra: individualus PGR vamzdelis, 4/8 juostelių PGR vamzdis, PGR plokštelės.
Labio'sPGR vartojimo reikmenysturėti šiuos dalykusprivalumų:
PGR plokštelės: Platus termociklerio suderinamumas;Didelis kontrastas, lengvas šulinio identifikavimas;gerai atspindi fluorescenciją; gerasšilumos perdavimas;Sertifikuoti DNazės, RNazės, DNR, PGR inhibitoriai ir patikrinti, ar nėra pirogenų.
Atskiri PGR mėgintuvėliai: Atsparus garavimui; gerasšilumos perdavimas;puikus optinis skaidrumas; Sertifikuoti DNazės, RNazės, DNR, PGR inhibitoriai ir patikrintas be pirogeno.
4/8 juostelių PGR vamzdeliai: Itin plonos sienos; didelis skaidrumas; geras fluorescencinis atspindys;gali būti naudojamas farmacijos pramonėje, maisto pramonėje ir molekulinėje biologijoje; aukštos kokybės gryna PP medžiaga; sertifikuoti DNazės, RNazės, DNR, PGR inhibitoriai ir patikrintas be pirogenų.
Paskelbimo laikas: 2023-09-09